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生產(chǎn)廠家為你介紹聚丙烯酰胺PAM絮凝劑凝膠電泳的作用原理

點(diǎn)擊次數(shù):1240  更新時(shí)間:2020-03-06

生產(chǎn)廠家為你介紹聚丙烯酰胺PAM絮凝劑凝膠電泳的作用原理  

聚丙烯酰胺凝膠電泳簡(jiǎn)稱為PAGE(Polyacrylamide gel electrophoresis),是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質(zhì)的一種常用電泳技術(shù)。是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質(zhì)的一種常用電泳技術(shù),用于分離蛋白質(zhì)和寡核苷酸。聚丙烯酰胺凝膠由單體丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺聚合而成,聚合過(guò)程由自由基催化完成。催化聚合的常用方法有兩種:化學(xué)聚合法和光聚合法。化學(xué)聚合以過(guò)硫酸銨(APS)為催化劑,以四甲基乙二胺(TEMED)為加速劑。在聚合過(guò)程中,TEMED催化過(guò)硫酸銨產(chǎn)生自由基,后者引發(fā)丙烯酰胺單體聚合,同時(shí)甲叉雙丙烯酰胺與丙烯酰胺鏈間產(chǎn)生甲叉鍵交聯(lián),從而形成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。

      作用原理:聚丙烯酰胺凝膠為網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),具有分子篩效應(yīng)。它有兩種形式:非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(Native-PAGE)和SDS-聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE);非變性聚丙烯酰胺凝膠,在電泳的過(guò)程中,蛋白質(zhì)能夠保持完整狀態(tài),并依據(jù)蛋白質(zhì)的分子量大小、蛋白質(zhì)的形狀及其所附帶的電荷量而逐漸呈梯度分開。

      聚丙烯酰胺凝膠電泳PAGE根據(jù)其有無(wú)濃縮效應(yīng),分為連續(xù)系統(tǒng)和不連續(xù)系統(tǒng)兩大類,連續(xù)系統(tǒng)電泳體系中緩沖液pH值及凝膠濃度相同,帶電顆粒在電場(chǎng)作用下,主要靠電荷和分子篩效應(yīng)。不連續(xù)系統(tǒng)中由于緩沖液離子成分,pH,凝膠濃度及電位梯度的不連續(xù)性,帶電顆粒在電場(chǎng)中泳動(dòng)不僅有電荷效應(yīng),分子篩效應(yīng),還具有濃縮效應(yīng),因而其分離條帶清晰度及分辨率均較前者佳。不連續(xù)體系由電極緩沖液、濃縮膠及分離膠所組成。濃縮膠是由AP催化聚合而成的大孔膠,凝膠緩沖液為pH6.7的Tris-HCl。分離膠是由AP催化聚合而成的小孔膠,凝膠緩沖液為pH8.9 Tris-HCl。電極緩沖液是pH8.3 Tris-甘氨酸緩沖液。2種孔徑的凝膠、2種緩沖體系、3種pH值使不連續(xù)體系形成了凝膠孔徑、pH值、緩沖液離子成分的不連續(xù)性,這是樣品濃縮的主要因素。

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